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摘要：采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳方法，对花斑副沙鳅（Parabotia fasciata Dabry）的鰓、心、肝胰脏、肠、肾、肌肉、眼、脑8种组织中的过氧化氢酶（CAT）、酯酶（EST）、乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和醇脱氢酶（ADH）进行了分析。结果表明，花斑副沙鳅的7种同工酶表达具有明显的组织特异性，8种组织中检测出3种CAT同工酶、8种EST同工酶、4种LDH同工酶、8种MDH同工酶、10种POD同工酶、10种SOD同工酶、10种ADH同工酶表达。其中，CAT-3、EST-7仅在肝胰脏表达，LDH-4、SOD-9、ADH-3僅在肾表达。
关键词：花斑副沙鳅（Parabotia fasciata Dabry）；同工酶；表达；组织特异性
中图分类号：Q959.46+8：Q55 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）14-2736-07
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.14.035
Abstract： Seven isozymes including Catalase（CAT）， Esterase（EST）， Lactic acid hydrogen enzymes（LDH）， Malate dehydrogenase（MDH）， Peroxidase（POD）， Superoxyde dismutase（SOD）， Alcohol dehydrogenase（ADH） were examined in eight tissues （gill， heart， hepatopancreas， intestines， kidney， muscle， brain and eye） of Parabotia fasciata Dabry by vertical polyacrylamide gel gradient electrophoresis. The results showed that isozyme genes in P. fasciata apparently exhibited tissue specific expression to different degrees. The detected band number of CAT， EST， LDH， MDH， POD， SOD， ADH were 3， 8， 4， 8， 10， 10， 10， respectively. The isozyme CAT-3 and EST-7 were expressed only in hepatopancreas. The isozyme LDH-4， SOD-9 and ADH-3 were expressed only in the renal tissue.
Key words： Parabotia fasciata Dabry； isozyme； expression； tissue specificity
花斑副沙鳅（Parabotia fasciata Dabry）隶属鲤形目（Cypriniformes）鳅科（Cobitidae）沙鳅亚科（Botiinae）副沙鳅属（Parabotia Dabry de Thiersant），俗称黄鳅、黄沙鳅、伍氏沙鳅，为中国特有鱼类。广泛分布于黑龙江至珠江的各水系，长江上游主要分布在岷江、沱江、嘉陵江等长江干流水系，是一种以水生昆虫和藻类为食物的小型底栖鱼类[1]。近年来，由于过度捕捞、水利工程修建、水环境污染等环境的改变，野生资源量急剧下降[2]。目前对花斑副沙鳅的研究较少，且主要集中在发育生物学、繁殖生物学、年龄与生长、肌肉营养等方面[2-8]，未见关于同工酶的研究报道。试验采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法，对花斑副沙鳅的鰓、心、肝胰脏、肠、肾、肌肉、眼、脑8种组织中的过氧化氢酶（CAT）、酯酶（EST）、乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和醇脱氢酶（ADH）7种同工酶进行了电泳检测，分析花斑副沙鳅同工酶的组织表达情况，了解花斑副沙鳅的生化遗传特性，旨在为花斑副沙鳅的种质资源保护、人工选育、病理研究、环境生态影响评价等方面提供遗传学基础资料。
1 材料与方法
1.1 材料
参试花斑副沙鳅为长江上游鱼类资源保护与利用四川省重点实验室人工繁殖个体，取全长130～159 mm、体长110～135 mm、体质量13.9～26.5 g、体格健壮、体表无伤个体30尾用于试验。取样前清水中停饵暂养1 d。
1.2 方法
1.2.1 样品制备 花斑副沙鳅断鳃断尾放血，冰浴条件下迅速摘取鰓、心、肝胰脏、肠、肾、肌肉、眼、脑8种组织，滤纸吸去血渍，预冷生理盐水清洗组织，以样品∶缓冲液=1∶7的比例加入0.1 mol/L PBS缓冲液（pH 7.0）混合。冰浴匀浆后加入100 μL氯仿混匀；4 ℃冰箱中静置10 min；14 000 r/min低温离心15 min（2次），取上清液，分装，用于电泳分析或放入-80 ℃超低温冰箱里保存备用。
1.2.2 电泳与染色 按照文献[9]的方法进行聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳，浓缩胶浓度为4%，分离胶浓度为7.5%。电极缓冲液为Tris-Gly（pH 8.3）。加样前50 V电压下预电泳30 min，预电泳结束后每个加样孔加样15 μL。指示剂在浓缩胶时电泳电压为80 V，指示剂完全进入分离胶后电压升高至120 V，电流为15 mA；在冰柜中保持4 ℃进行电泳。待指示剂距凝胶底端2 cm处时停止电泳。取出凝胶用预冷去离子水洗净，放入染液进行染色。染液现配现用，染色流程参考有关方法[10-13]，稍作改进。